販売しているストレッチチャンバーは、無菌状態ではなくまた細胞接着剤も塗布されておりません。その為チャンバーは最初に121℃で20分間のオートクレーブ処理が必要になり、その後細胞を播種する前に被膜を細胞外つ質でコーティングする必要があります。
コーティング方法：フィブロネクチン
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0.05mg/mlのフィブロネクチンをPBS（リン酸緩衝生理食塩水）に溶解し、フィブロネクチン溶液を調製します。
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ストレッチチャンバーを培養皿に入れ、フィブロネクチン溶液をチャンバーウェルに注ぎ、底面が完全に覆われるようにします。
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フィブロネクチンで処理したチャンバーを培養皿で37℃で少なくとも4時間インキュベートします。
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インキュベーターから培養皿を取り出し、ピペットまたは他の適切な機材を使用してチャンバーから残りの溶液を吸い上げます。
コーティング方法：コラーゲン
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塩酸（pH3.0,1mM)の希釈液を準備しオートクレーブします。
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1型コラーゲンをオートクレーブした塩酸で希釈します。
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ストレッチチャンバーを培養皿に入れ、コラーゲン溶液をチャンバーウェルに底面が完全に覆われるように注ぎます。
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培養皿に蓋をして、37℃で少なくとも4時間以上インキュベートします。
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インキュベーターから培養皿を取り出し、しばらく静置します。その後、ピペットまたは他の適切な機材を使用して、チャンバーから残りの溶液を吸い上げます。
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上記の手順の後に余分なコラーゲン溶液を除去するために、無血清培養液でチャンバーを2回すすいでください。
コーティング方法：ゼラチン
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ゼラチン粉末(2％)をPBSに溶解して、ゼラチン溶液を調製します。
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ストレッチチャンバーを培養皿に入れ、ゼラチン溶液をチャンバーウェルに注ぎ、底面が完全に覆われるようにします。
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培養皿に蓋をして、37℃で少なくとも4時間以上インキュベートします。
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インキュベーターから培養皿を取り出し、ピペットまたは他の適切な機材を使用して、チャンバーから残りの溶液を吸い上げます。
伸展後の蛍光染色の方法
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外科用ナイフ（約0.8×0.5 cm）を使用して、ストレッチチャンバーから細胞面を接合します。サイズは、手順2以降から使用する容器のサイズによって異なります。長辺を合わせるための接合伸展方向により、後から伸展方向が把握しやすくなります。
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手順1でスプライシングしたメンブレンをPBS（-）の入った容器に入れます。 [カバーガラス付きの1×1チャンバー（フレームなし）を使用]
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PBS（-）で2回洗浄します。
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PBS（-）中の4％ホルマリン溶液で固定し、室温で5分間振動撹拌させます。
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室温でPBS（-）で5分間、3回で洗浄します。
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PBS（-）中の0.1％TritonX-100、細胞膜を貫通させ、室温で5分間振動撹拌させます。
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室温でPBS（-）で5分間、3回で洗浄します。
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室温でPBS（-）で2％BSAをブロックし、30分間振動撹拌させます。
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室温でPBS（-）の0.1％Tween20の一次抗体を30分間振動撹拌させます。
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室温でPBS（-）液中の0.1％Tween20を5分間、3回で洗浄します。
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室温でPBS（-）中の0.1％Tween20中の二次抗体を30分間振動撹拌させます。
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室温でPBS（-）液中の0.1％Tween20を5分間、3回で洗浄します。
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囲うようにスライドガラスに播種します。（Perma Fluor）–細胞膜側を下にします。
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蛍光観察します。
